厭氧培養(yǎng)箱之厭氧菌的培養(yǎng)操作

厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養(yǎng)厭氧菌，必須創(chuàng)造一個無氧的環(huán)境。通常用培養(yǎng)基中加入還原劑，或用物理、化學方法去除環(huán)境中的游離氧，以降低氧化還原電勢。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基，牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多，可根據(jù)實際情況選用。

1．厭氧缸法接種好標本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變扰囵B(yǎng)，厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學的方法使缸內造成厭氧環(huán)境，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來。

2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內裝氣體發(fā)生管（有p氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿）、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后，盡量擠出袋內空氣，然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管，后折斷美蘭指示劑管，命名袋內在半小時內造成無氣環(huán)境。如不突變表示袋內已達厭氧狀態(tài)，可以孵育。

3．厭氧手套箱（Anaerobie glove box）即厭氧培養(yǎng)箱，是迄今為止*的培養(yǎng)厭氧菌佳儀器之一。它是一個密閉的大型金屬箱，箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板，板上裝有兩個手套，可通過手套在箱內進行操作，故名。箱側有一交換室，具有內外二門，內門通箱內先關著。欲放物入箱，先打開外門，放入交換室，關上外門進行抽氣和換氣（H2，CO2，N2）達到厭氧狀態(tài)，然后手伸入手套把交換室內門打開，將物品移入箱內，關上內門。箱內保持厭氧狀態(tài)，也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理。該箱可調節(jié)溫度，本身是孵箱或孵箱即附在其內，還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落，這種厭氧箱適于作厭氧細菌的大量培養(yǎng)研究，大量培養(yǎng)基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動調節(jié)。

4.厭氧盒：原理同厭氧袋，有成品銷售。

5.生物耗氧法：在一密閉的容器內放以生物（多是植物），消耗氧氣，同時產生二氧化碳，供細菌生長用。我沒見過。

6.焦性末食子酸法：在一潔凈的玻片上鋪上紗布或濾紙，均勻撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速將已接種細菌的平板倒扣在上面，用融化的白蠟封邊，造成一個封閉空間。焦性末食子酸與堿反應后耗氧。該法用于厭氧不嚴格的厭氧菌的培養(yǎng)，簡單。如有梭狀芽孢桿菌。

7.皰肉培養(yǎng)基：本身就是一個不需特殊設備的厭氧培養(yǎng)法。皰肉和肉湯裝入大試管，液面封凡士林，造成無氧環(huán)境。

操作室厭氧環(huán)境形成：按使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室內放入二個無毒塑料袋。通電源開照明燈，開控溫儀，調節(jié)所需溫度及安全溫度。操作室內放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉)。關緊取樣室內外門，并抽真空校驗。操作室內第一次置換（氮氣置換）：先用橡皮管插入操作室內進氣口，另一頭插入塑料袋。接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥，使二只塑料袋充足氮氣，然后扎緊袋口。把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。把塑料袋內氮氣漸漸地放于操作室內，至全部放出。操作室第二次置換（氮氣置換）重復一 次充氮過程，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。操作室第三次置換（混合氣體置換）：（混合氣體配比為：N2↑ 85% H2 ↑ 10% CO2↑ 5%）調換氣路打開混合氣道通閥門進氣，充氣時要隨時腳踏開關開閉排氣?；旌蠚獬錆M塑料袋后，關掉混合氣直通閥（三通閥），使混合氣經過流量計輸入操作并調整流量計，流量為每分鐘10毫升左右。把塑料袋內混合氣漸漸排于操作室內。通過三次換氣后，操作室內氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。操作室內打開鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一 小時后打開美蘭指示劑（美蘭安瓶）觀察其變色情況，不變色為操作室內達到厭氧環(huán)境。開紫外線滅菌燈，室內進行滅菌處理。滅菌時間自定。 

厭氧培養(yǎng)箱注意事項：盡可能地安裝于空氣清靜，溫度變化較小的地方。開機前應全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的說明書、掌握正確的使用方法。培養(yǎng)物放入必須是在操作室內達到絕對厭氧環(huán)境后放入。如發(fā)生故障（停氣等原因）操作室內仍可保持12小時厭氧狀態(tài)。（超過12小時則根據(jù)需要把培養(yǎng)物取出另作處理）。經常注意氣路有無漏氣現(xiàn)象。調換氣瓶時，注意要扎緊氣管，避免流入含氧氣體。真空泵按要求使用，定期檢查加油。停止使用，關閉總電源鍵，及設備后部的電源開關。

YQX-Ⅱ厭氧培養(yǎng)箱是一種在無氧環(huán)境條件下進行細菌培養(yǎng)及操作的專用裝置。它能提供嚴格的厭氧狀態(tài)恒定的溫度培養(yǎng)條件和具有一個系統(tǒng)化、科學化的工作區(qū)域。在本裝置內操作培養(yǎng)，可以培養(yǎng)難生長的厭氧生物，又能避免以往厭氧生物在大氣中操作時接觸氧而死亡的危險性。因此本裝置是厭氧生物檢測科研的理想工具。本裝置也是一物多用的良好儀器，如改變操作方式，為微需氧菌的生長繁殖提供良好的生長條件。